Μοριακή ταυτοποίηση απομονώσεων μαύρων ασπέργιλλων από κυπριακούς αμπελώνες και προσδιορισμός της τοξικογόνου ικανότητας τους
Date Issued
2014
Author(s)
Advisor
Abstract
Οι μύκητες του γένους Aspergillus του αθροίσματος Nigri (μαύροι ασπέργιλλοι) προκαλούν υποβάθμιση των αμπελοοινικών προϊόντων λόγω τις ικανότητας τους να παράγουν Ωχρατοξίνη Α (ΟΤΑ). Το είδος Aspergillus carbonarius έχει χαρακτηρισθεί ως το πιο τοξικογόνο μεταξύ των μαύρων ασπέργιλλων. Πολλές χώρες της Μεσογειακής λεκάνης έχουν αναφέρει την επιμόλυνση των κρασιών και άλλων αμπελοοινικών προϊόντων με ΟΤΑ και έχουν επιχειρήσει να χαρακτηρίσουν ως προς το είδος και ως προς την τοξικογόνο ικανότητα τους ασπέργιλλους που μολύνουν τα οινοποιήσιμα σταφύλια. Αναφορικά με την Κύπρο, δεν υπάρχουν δεδομένα σχετικά με τους πληθυσμούς των μαύρων ασπέργιλλων που επιμολύνουν τους κυπριακούς αμπελώνες. Σε αυτή την εργασία πραγματοποιήθηκε μοριακή ταυτοποίηση του πληθυσμού των μαύρων ασπεργίλλων που απομονώθηκαν την καλλιεργητική περίοδο του 2011 από σταφύλια των ποικιλιών Cabernet sauvignon (Άγιος Αμβρόσιος) και Μαραθεύτικο (Πάχνα) και ακολούθως προσδιορισμός της τοξικογόνου ικανότητας των απομονώσεων αυτών. Για τη μοριακή ταυτοποίηση αρχικά έγινε απομόνωση γενομικού DNA από τους μύκητες, και στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε PCR στα δείγματα DNA με εξειδικευμένους εκκινητές που ενισχύουν το γονίδιο της καλμοδουλίνης του οποίου η αλληλουχία χρησιμοποιείται για την κατάταξη των μαύρων ασπέργιλλων σε επίπεδο είδους. Ακολούθησαν αντιδράσεις αλληλούχησης και ανάλυση των αλληλουχιών με τη χρήση του αλγόριθμου BLAST. Για το χαρακτηρισμό της τοξικογόνου ικανότητας των απομονώσεων αρχικά έγινε καλλιέργεια τους σε κατάλληλο θρεπτικό υπόστρωμα ενώ στη συνέχεια τρεις κυλινδρικοί δίσκοι της καλλιέργειας αφαιρέθηκαν με τη χρήση διακορευτή και τοποθετήθηκαν σε μεθανόλη για την εκχύλιση της ΟΤΑ. Ακολούθησε ποσοτικοποίηση της ΟΤΑ με τη χρήση υγρής χρωματογραφίας (HPLC). Από τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας διαπιστώθηκε ότι το κυρίαρχο είδος μαύρων ασπέργιλλων στους κυπριακούς αμπελώνες είναι ο A. tubingensis (96%) ενώ σε μικρότερο ποσοστό εντοπίστηκε και ο A. niger (4%). Επίσης δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές ως προς τη σύνθεση του πληθυσμού μεταξύ των δύο ποικιλιών που εξετάστηκαν. Όμως, η σύνθεση του πληθυσμού των μαύρων ασπέργιλλων
διέφερε στους κυπριακούς αμπελώνες σε σχέση με τους αμπελώνες στις υπόλοιπες χώρες τις Μεσογειακής λεκάνης (επικρατεί ο A. carbonarius). Επίσης, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της τοξικογόνου ικανότητας των απομονώσεων ήταν σε συμφωνία με τη βιβλιογραφία, όπου αναφέρεται ότι ένα ποσοστό των ειδών A. tubingensis και A. niger έχουν τοξικογόνο ικανότητα. Με τα μέχρι στιγμής δεδομένα φαίνεται ότι ο κίνδυνος επιμόλυνσης με είδη όπως A. carbonarius είναι χαμηλός. Για να μπορέσουν να εξαχθούν πιο γενικευμένα συμπεράσματα πρέπει να πραγματοποιηθούν διευρυμένες δειγματοληψίες από όλες τις περιοχές αμπελοκαλλιέργειας της Κύπρου και να χαρακτηριστούν οι απομονώσεις ως προς το είδος και την παραγωγή ΟΤΑ.
διέφερε στους κυπριακούς αμπελώνες σε σχέση με τους αμπελώνες στις υπόλοιπες χώρες τις Μεσογειακής λεκάνης (επικρατεί ο A. carbonarius). Επίσης, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της τοξικογόνου ικανότητας των απομονώσεων ήταν σε συμφωνία με τη βιβλιογραφία, όπου αναφέρεται ότι ένα ποσοστό των ειδών A. tubingensis και A. niger έχουν τοξικογόνο ικανότητα. Με τα μέχρι στιγμής δεδομένα φαίνεται ότι ο κίνδυνος επιμόλυνσης με είδη όπως A. carbonarius είναι χαμηλός. Για να μπορέσουν να εξαχθούν πιο γενικευμένα συμπεράσματα πρέπει να πραγματοποιηθούν διευρυμένες δειγματοληψίες από όλες τις περιοχές αμπελοκαλλιέργειας της Κύπρου και να χαρακτηριστούν οι απομονώσεις ως προς το είδος και την παραγωγή ΟΤΑ.
File(s)![Thumbnail Image]()
Name
Abstract_LazariMaria.pdf
Size
161.66 KB
Format
Adobe PDF
Checksum (MD5)
d4fe6fd624f36fe131c555502fb2366a