Please use this identifier to cite or link to this item:
https://hdl.handle.net/20.500.14279/30649| Title: | Κλωνοποίηση defensin ισομόρφων και παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης σε σύστημα ετερόλογης έκφρασης E. Coli | Authors: | Πολυβίου, Βασίλης | Keywords: | Defensins;Anti-microbial peptides;τομάτα;ετερόλογο σύστημα έκφρασης E. coli BL21(DE3);IPTG | Advisor: | Νικολουδάκης, Νικόλαος | Issue Date: | May-2023 | Department: | Department of Agricultural Sciences, Biotechnology and Food Science | Faculty: | Faculty of Geotechnical Sciences and Environmental Management | Abstract: | ,Οι defensins είναι μικρές κατιονικές πρωτεΐνες, με όμοια και συμπαγή δομή, πλούσιες σε κυστείνη και διατηρούν την σταθερότητα τους μέσω των δισουλφιδικών δεσμών. Αυτά τα αντιμικροβιακά πεπτίδια (Anti-microbial peptides-AMPs), εκφράζονται ή είναι δυνατόν να υπάρχουν ήδη και να είναι ενεργά σε περίπτωση βιοτικής ή αβιοτικής καταπόνησης. Εκτός από το ότι είναι διαδεδομένες σε όλους του ευκαρυοτικούς οργανισμούς, έχουν μια τεράστια γκάμα από τρόπους/μηχανισμούς δράσης ενάντια σε παθογόνα και καθιστούν την πρώτη γραμμή άμυνας ως αμυντικός μηχανισμός των φυτών. Σε αυτή την εργασία παρουσιάζεται η χρήση του ετερόλογου συστήματος του E. coli BL21(DE3) και του φορέα έκφρασης pET6xHN για την παραγωγή ανασυνδυασμένης πρωτεΐνης. Τα γονίδια που χρησιμοποιήθηκαν για το πείραμα ήταν τα δύο διαφορετικά γονίδια defensins (Solyc04g008470.3.1 και Solyc07g009060.4.1) από τομάτα, τα οποία έχουν δείξει αυξημένη δραστικότητα έναντι μικροοργανισμών. Μετά από διαδικασίες που ακολουθήθηκαν καταφέραμε να κλωνοποιήσουμε τα γονίδια, να τα περάσουμε στους φορείς έκφρασης και να μετασχηματίσουμε τα κύτταρα του E. coli που εκφράζουν την πρωτεΐνη. Η επαγωγή της πρωτεΐνης πραγματοποιήθηκε με 0.5 mM IPTG και έγινε έλεγχος της εως τις 4 ώρες, όπου φάνηκε την 4η ώρα να έχει την μέγιστη επαγωγή. | Description: | Defensins are small cationic proteins with similar and compact structures, rich in cysteine, and maintain their stability through disulfide bonds. These antimicrobial peptides (AMPs) are expressed or may already exist and be active in cases of biotic or abiotic stress. Besides being widespread in all eukaryotic organisms, they have a wide range of modes/mechanisms of action against pathogens, making them the first line of defense as a plant's defense mechanism. This study presents the use of the heterologous system of E. coli BL21(DE3) and the expression vector pET6xHN for the production of a recombinant protein. The genes used for the experiment were two different defensin genes (Solyc04g008470.3.1 and Solyc07g009060.4.1) from tomatoes, which have shown increased activity against microorganisms. After following the procedures, we managed to clone the genes, transfer them into expression vectors, and transform E. coli cells expressing the protein. Protein induction was performed with 0.5 mM IPTG, and its expression was monitored for up to 4 hours, showing maximum induction at the 4th hour. | URI: | https://hdl.handle.net/20.500.14279/30649 | Rights: | Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International | Type: | MSc Thesis | Affiliation: | Cyprus University of Technology |
| Appears in Collections: | Μεταπτυχιακές Εργασίες/ Master's thesis |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Βασίλης Πολυβίου_2023_MSC_Περίληψη.pdf | ΠΕΡΙΛΗΨΗ | 302.41 kB | Adobe PDF | View/Open |
CORE Recommender
Page view(s) 50
79
Last Week
0
0
Last month
6
6
checked on Nov 21, 2024
Download(s) 50
76
checked on Nov 21, 2024
Google ScholarTM
Check
This item is licensed under a Creative Commons License
