Χρήση αμυντικών πεπτιδίων Defensin και συγκριτική δράση έναντι Gram αρνητικών βακτηρίων Xanthomonas Campestris Pv Campestris με τη χρήση κυτταρομετρίας ροής

Abstract

Οι Defensins είναι αντιμικροβιακά πεπτίδια τα οποία εντοπίζονται σε όλους τους ζωντανούς οργανισμούς. Αποτελούνται από 45 έως 54 αμινοξέα. Εξαιτίας του μεγάλου αριθμού των Κυστεΐνών που υπάρχουν, οι δισουλφιδικοί δεσμοί που δημιουργούνται προσδίδουν στις Defensins αντοχή και σταθερότητα σε δυσμενείς περιβαλλοντικές συνθήκες. Επίσης, περιέχουν μία συγκεκριμένη αλληλουχία αμινοξέων που ξεκινούν από Γλυκίνη και καταλήγουν σε Κυστεΐνη, αλληλουχία η οποία ονομάζεται γ – μοτίβο. Mε βάση διάφορες μελέτες, θεωρείται πως o μηχανισμός δράσης των Defensins, σχετίζεται με την διαταραχή της Κυτταρικής Μεμβράνης μέσω της δέσμευσης μορίων όπως τα Φωσφολιπίδια. Το γεγονός πως δεν υπάρχουν αρκετά δεδομένα που να τον επεξηγούν αποτέλεσε και τον λόγο διεξαγωγής του συγκεκριμένου πειράματος. Σε αυτό το πείραμα, εφαρμόστηκαν 7 πεπτίδια της ίδιας συγκέντρωσης, σε κύτταρα που πάρθηκαν από μονή αποικία του Gram – αρνητικού βακτηρίου Xanthomonas campestris pv campestris. Με την τεχνική της Κυτταρομετρίας ροής και χρωστικών που διαχωρίζουν νεκρά και ζωντανά κύτταρα (Propidium Iodine και Thiazole Orange αντίστοιχα) τα 7 πεπτίδια ελέγχθηκαν ως προς την αντιμικροβιακή τους ικανότητα καθώς και τη χρονική τους διάρκεια. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν, έδειξαν πως 5 από τα 7 πεπτίδια λειτούργησαν αποτελεσματικά έναντι των κυττάρων του βακτηρίου και μάλιστα η αποδοτικότητά τους αυξάνονταν με το πέρασμα του χρόνου. Τέλος, αναλύθηκαν οι λόγοι που ενδέχεται να εξηγούν τα συγκεκριμένα αποτελέσματα καθώς και τον τρόπο λειτουργίας αυτών των αντιμικροβιακών πεπτιδίων.